È stata studiata l'incorporazione di L-alanina in vescicole di membrane plasmatiche isolate da cellule, in fase stazionaria di crescita di un tumore sperimentale altamente indifferenziato, come l'epatoma di Yoshida AH-130. L'utilizzazione, nello studio dei meccanismi di trasporto, di frammenti vescicolari di membrana, invece delle cellule, permette di escludere le eventuali interferenze metaboliche; ciò è particolarmente utile nelle cellule trasformate, in cui si ha un incremento nell'assunzione di diversi substrati che potrebbe dipendere o da alterazioni primarie dei sistemi di trasporto o dall'aumento del metabolismo. Misurando l'incorporazione nel tempo della L-alanina nelle vescicole è stato evidenziato un differente andamento rispetto a quanto osservato in vescicole di membrana plasmatica da fegato di ratto. Lo studio della cinetica mostra, contrariamente a quanto osservato negli epatociti in cui l'alanina entra attraverso due sistemi di trasporto (A e ASC), la presenza di un solo trasportatore. L'evidenziazione di una sola componente a saturazione potrebbe, però, dipendere dall'impossibilità di discriminare in base ai soli esperimenti cinetici, due sistemi con costanti cinetiche poco diverse.
Referenze Bibliografiche
[1] M.J. WEPER (1973) - Hexose transport in normal and Rous sarcoma virus-transformed cells. «J. Biol. Chem.», 248, 2978-2983.
[2] M. HATANAKA (1974) - Transport of sugars in tumor cell membranes. «Biochim. Biophys. Acta.», 355, 77-104.
[3] R.F. KLETZIEN and J.F. PERDUE (1974) - Sugar transport in chick embryo fibroblasts. II. Alteration in transport following transformation by a temperature sensitive mutant of the Rous sarcoma virus. «J. Biol. Chem.», 249, 3375-3382.
[4] D.O. FOSTER and A.B. PARDEE (1969) - Transport of amino acid by confluent and non-confluent 3T3 and Polyoma virus-transformed 3T3 cells growing on glass cover slips. «J. Biol. Chem.», 144, 2675-2681.
[5] M. INBAR, H. BEN-BASSAT and L. SACHS (1971) - Localization of amino acid and carbohydrate transport sites in the surface membrane of normal and transformed mammalian cells. «J. Membrane Biol.», 6, 195-205.
[6] K.J. HISSELBACHER (1972) - Increased uptake of amino acid and 2-deoxy-D-glucose by virus transformed cells in culture. «Proc. Natn. Acad. Sci. USA», 69, 585-589.
[7] S.J. FRIEDMAN and P. SKEHAN (1981) - Malignancy and the cell surface. In: The transformed cell (I.L. Cameron and T.B. Pool, eds.), Academic Press, New York.
[8] R. COMOLLI, A. CASALE and D. MARIOTTI (1984) - Amiloride and glucose effects on the intracellular pH of Yoshida rat ascites hepatoma AH-130 cells grown in vivo. «Cell Biol. Int. Rep.», 8, 297-307.
[9] E.F. BOUMENDIL—PODEVIN and R.A. PODEVIN (1983) - Isolation of basolateral and brush-border membranes form rabbit kidney cortex. Vesicle integrity and membrane sidedness of the basolateral fraction. «Biochim. Biophys. Acta», 735, 86-94.
[10] W. SCHONER, C. VON ILBERG, R. KRAMER and W. SCHUBERT (1967) - On the mechanism of $Na^{+}$ and $K^{+}$-stimulated hydrolysis of adenosine triphosphate. «Eur. J. Biochem.», 1, 334-345.
[11] R.M. MICHELL and J.N. HAWTHONE (1965) - The site of diphosphoinositine synthesis in rat liver. «Biochem. Biophys. Res. Comm.», 21, 333-338.
[12] B.S.S. MASTERS, C.H. WILLIAMS Jr and H. KAMIN (1967) - The preparation and properties of microsomal TPNH-cytochrome c reductase from pig liver. «Methods in Enzymology», X, 565-573.
[13] L. SMITH (1955) - Spectrophotometric assay of cytochrome c oxidase. In: «Methods of Biochemical analysis» vol. 2, Glick D. Ed. pp. 427-437. Interscience Pub., New York.
[14] M.M. BRADFORD (1976) - A rapid and sensitive method for the quantitation of protein utilizing the principle of dye-protein binding. «Anal. Biochem.», 72, 248-254.
[15] M.G. LEONARDI, R. COMOLLI and B. GIORDANA (1986) - Sodium-dependent amino acid transport in plasma membrane vesicles from rat liver. «Atti Accad. Naz. Lincei», 80, 313-322.
[16] M. SAMSON and M. FEHLMANN (1982) - Plasma membrane vesicles from isolated hepatocytes retain the increase of amino acid transport by dibutyryl cyclic AMP in intact cells. «Biochim. Biophys. Acta», 687, 35-41.
[17] H.J. SIPS, J.M.M. VAN AMELSVOORT and K. VAN DAM (1980) - Amino acid transport in plasma membrane vesicles from rat liver. «Eur. J. Biochem.», 105, 216-224.
[18] J.W. EDMONSON, L. LUMENG and T.-K. LI (1979) - Comparative studies of alanine and $\alpha$-aminoisobutyric acid uptake by freshly isolated rat liver cells. «J. Biol. Chem.», 254, 1653-1658.
[19] M.S. KILBERG, M.E. HANLOGTEN and H.N. CHRISTENSEN (1981) - Characteristics of system ASC for transport of neutral amino acids in isolated rat hepatocyte. «J. Biol. Chem.», 256, 3304-3312.
[20] L.O. KRISTENSEN (1980) - Energization of alanine transport in isolated rat hepatocytes. «J. Biol. Chem.», 255, 5236-5243.
[21] D.C. QUILLAND, C.G. TODDERUD, D.S. KELLEY and R.F. KLETZIEN (1982) - Sodium-gradient-stimulated transport of L-alanine by plasma-membrane vesicles isolated from liver parenchymal cells of fed and starved rats. «Biochem. J.», 208, 685-693.
[22] M.A. SHOTWELL and D.L. OXENDER (1983) - The regulation of neutral amino acid transport by amino acid availability in animal cells. «TIBS», 36, 314-316.
[23] M.E. HANDLOGTEN, R. GARCIA-CANERO, K.T. LANCASTER and H.N. CHRISTENSEN (1981) - Surprising differences in substrate selectivity and other properties of system A and ASC between rat hepatocytes and the hepatoma cell line HTC. «J. Biol. Chem.», 256, 7905-7909.
[24] I.H. SEGAL (1975) - Enzyme kinetics. John Wiley and Sons, New York.
Con il contributo del Ministero per i Beni e le Attività Culturali